HPLC测定西红花提取物及其片剂中各西红花苷含量
作者:佚名 日期:2018年06月05日 来源:本站原创 浏览:

核心提示:HPLC测定西红花提取物及其片剂中各西红花苷含量 (中国药科年夜学 南京 210009)       摘要  报道反相HPLC测定西红花提取物及其片剂中西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及西红花总苷的含量,Spherisorb 5 ODS柱(150mm

HPLC测定西红花提取物及其片剂中各西红花苷含量

(中国药科年夜学 南京 210009)

  

   

摘要  报道反相HPLC测定西红花提取物及其片剂中西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及西红花总苷的含量,Spherisorb 5 ODS柱(150mm×4.6mm),配预柱的Waters在线过滤器,流动相为甲醇—水(55∶45),检测波长为440nm,室温,流速1.0mL/min,纸速0.5cm/min。加样收受接收率:西红花提取物中西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及其总苷分别为103.3%、99.3%、100.4%。各自的RSD(%)按序为3.2、3.7、1.7(n=9);西红花多苷片模仿片中西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及其总苷分别为98.4%、101.7%、99.8%。其RSD(%)分别为1.5、1.1、2.0(n=6)。本法分别度好,周详精确,可用于控制西红花提取物及其制剂的质量。
关键词:西红花 西红花苷 西红花多苷片 HPLC
    西红花为茑尾科植物番红花(Crocus sativus L.)的干燥柱头。别名藏红花,是一味久负盛名的中药。

   西红花中重要含西红花苷类化合物,即西红花酸(Crocetin)与不合糖基结合的一系列酯苷,西红花苷-Ⅰ是重要成分,其余为西红花苷-Ⅱ、西红花-Ⅲ及西红花苷-Ⅳ等。
西红花苷定量分析办法有比较法[1]、比色测定[2]、分光光度法[3]、薄层扫描法[4]及高效液相色谱法[5]等。本文建立了以西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ为对比品,甲醇—水(55∶45)作流动相,可见—紫外分别检测各类西红花苷的反相高效液相色谱法,用于其提取物及片剂的含量测定,办法精确,收受接收率好。
   1 仪器与色谱前提
Varian 5060型HPLC(美国)配Waters 490紫外—可见分光光度检测器(美国)和Varian Vis TA-401色谱数据体系。色谱柱:Spherisorb 5 ODS柱(150mm×4.6mm),配预柱的Waters在线过滤器,流动相:甲醇—水(55∶45),流速:1.0mL/min,室温,检测波长:440nm。
   2 药品及试剂
西红花苷-Ⅰ及西红花苷-Ⅱ对比品(从西红花中提取分别精制,经紫外、红外、核磁共振剖断。HPLC法测定含量均为98%以上),西红花提取物及西红花多甙片(均为上海某制药厂)。重蒸馏水,其他试剂均为分析纯。西红花苷-Ⅲ、Ⅳ均从西红花中克己,TLC一个斑点。
   3 测定波长的选择
分别作西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ、西红花提取物及其西红花多甙片紫外—可见接收曲线,λmax为(432±2)nm及(458±2)nm。高效液相色谱法按文献[5]波长440nm测定,成果知足。


4 测定各组分的保存时光及分别度

在上述前提下,分别周详称取西红花苷-Ⅰ 5.0mg、西红花苷-Ⅱ 4.9mg、西红花苷-Ⅲ 5.2mg、西红花苷-Ⅳ 10mg,置10mL量瓶中,各加甲醇消融并稀释至刻度,摇匀。各取上述溶液适量置10mL量瓶中,以流动相稀释至刻度,混匀,进样10μL,测定,各峰之间的分别度均年夜于1.5,见表1。

表1 体系适应性实验成果

名称

保存时光
(min)

峰宽

纸速
(0.4cm/min)

分别度

西红花苷-Ⅰ

3.72

0.6

1.50

1.56
2.31
2,伊朗藏红花,一种植物,属于鸢尾科。伊朗是藏红花最早出现的国家之一.86

西红花苷-Ⅱ

5.86

0.5

1.25

西红花苷-Ⅳ

9.90

0.9

2.25

西红花苷-Ⅲ

23.87

3.0

7.50

     5 线性及周详度测定
线性关系:周详汲取西红花苷-Ⅰ及西红花苷-Ⅱ贮备液各适量,分别逐级稀释,配成系列标准溶液,进样量均为10μL,成果回归方程分别为:
Y=3.014×107X-6.019×105 r=0.9999Y=3.460×107X-1.612×105 r=0.9999西红花苷-Ⅰ及西红花苷-Ⅱ在0.10~5.0mg范围内有优胜的线性关系。
日内周详度成果:取合适浓度的西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及西红花总苷对比品溶液,每隔1h进样10μL,各反复进样9次,测定响应峰面积,其RSD(%)分别为1.5、1.6、1.6。
日间周详度:天天测1次,共6d,分别测得西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及西红花总苷的RSD(%)依次为1.9、1.8及2.0。
     6 收受接收率实验
6.1 加样收受接收率 周详称取已测定含量的西红花提取物供试品适量,分别参加不合量的西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及西红花总苷对比品,照含量测定项下办法测定,成果收受接收率(n=9)分别为103.3%、99.3%、100.4%,RSD为3.2%、3.7%、1.7%。
6.2 模仿片收受接收率 按处方配制模仿片3批,周详称取适量(约相当于西红花提取20~25mg),同上法分别加不合量的各对比品,置10mL量瓶中,加甲醇适量,超声15min,加甲醇至刻度,摇匀,过滤,弃去初滤液,取续滤液作为供试品溶液,照含量测定项下办法测定,成果收受接收率(n=6)分别为98.4%、101.7%、99.8%,RSD为1.5%、1.1%、2.0%。
     7 样品测定
7.1 西红花提取物的测定
对比品溶液的制备:分别周详称取在硅胶干燥器中干燥的西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ对比品各5.0mg,置10mL量瓶中,加甲醇适量,振摇使全溶,加甲醇至刻度,混匀,进样10μL。
供试品溶液的制备:周详称取在干燥器中干燥供试品约20mg,置10mL量瓶中,加甲醇适量,振摇使全溶,加甲醇至刻度,混匀,进样10μL。
因为直线均经由过程零,以一点外标法测定并计算含量。以西红花苷-Ⅰ对比品为标准,测定供试品中西红花苷-Ⅰ、西红花总苷含量,另以西红花苷-Ⅱ对比品为标准,测定供试品中西红花苷-Ⅱ含量。成果见表2。

表2 样品含量测定成果(%)

批号

西红花提取物中总含量
(n=3)

西红花多甙片中含量
(n=4)

西红花
苷-Ⅰ

西红花
苷-Ⅱ

西红花
总苷

西红花
苷-Ⅰ

西红花
苷-Ⅱ

西红花
总苷

1

19.7

14.1

38.0

6.54

4.43

13.0

2

17.5

11.0

32.0

6.68

4.50

13.4

3

18.2

11.2

32.9

7.64

5.30

14.2

4

19.1

14.1

37.8

8.03

5.13

14.0

5

20.0

13.6

38.6

7.37

4.76

14,藏红花作用很多,自古以来就被爱美人士称为养颜圣品,喝藏红花有什么好处,当然是美容养颜啦.0

7.2 西红花多甙片的测定
对比品外标溶液同“7,藏红花的功效与作用及禁忌,具有活血化瘀、凉血解毒、解郁安神、美容养颜等功效.1”项下,取10μL注入液相色谱仪。
供试品溶液的配制:取本品20片,周详称定,研细,周详称取适量(约相当于西红花提取物20mg),置10mL量瓶中,加甲醇适量,超声15min,加甲醇至刻度,摇匀,过滤,弃去初滤液,周详量取续滤液10μL注入液相色谱仪。照西红花提取物项下的办法测定,计算西红花苷-Ⅰ、总苷及西红花苷-Ⅱ的含量。成果见表2。


参考文献


1  贾宗才.番红花的质量考察.中药传递,1984,9(2):11
2  木村雄四郎等.生药の规格设定に关すろ研究(第I报)サフラン中α-クロチンの新微量定量法.药学杂志,1953,73(4):25
3  周素娣.分光光度法测定西红花多甙片中西红花总甙含量.海峡药学,1997,9(2):3
4  金蓉鸾等.番红花质量研究.南京药学院学报,1986,17(4):247
5  Pfander H,et al.Separation of crocetin glycosyl esters by high-performance liquid chromatography.J Chromatogr,1982,234:443

(本文于1997年5月29日收到)



HPLC Determination of Crocin-Ⅰ,Crocin-Ⅱ and Crocins 
in Croucus Sativus Extract and Tablets

Zhou Sudi and Zhong Huijuan
(China Pharmaceutical University,Nanjing,210009)


  Abstract:This paper reports a reversed phase high performance liquid chromatographic method to determine crocin-Ⅰ、crocin-Ⅱand crocins in extract and tablets.The experimental conditions of HPLC were as follows:Spherisorb 5 ODS column(150mm×4.6mm)with on-line filter with Guark-column,mobile phase:methanol-water(55∶45),detection wavelength 440nm,flow-rate 1.0mL/min,paper feed-rate 0.5cm/min.The recovery of the method:crocin-Ⅰin crocus extracts was 103.3%(RSD<3.2%),crocin-Ⅱ in crocus extracts was 99.3%(RSD<3.7%),crocins in crocus extracts was 100.4%(RSD<1.7%)(n=9).Crocin-Ⅰ in crocins tablet 98.4%(RSD<1.5%),crocin-Ⅱ in crocins tablet was 101.7%(RSD<1.1%),crocins in crocins tablet was 99.8%(RSD<2.0%).The resolution of this method is fine and accurate.It provides a means for the control of crocus extracts and tablets.
  Key words:Crocus sativus L.,crocin-Ⅰ,crocin-Ⅱ,crocins tablets,HPLC

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